Como funcionam os kits ELISA

Método duplo do sanduíche do anticorpo 1. Pacote: Com 0.05MPH9. o pacote de carbonato é tamponado para diluir o anticorpo até um conteúdo de proteína de 1 a 10 μg/ml. Adicione 0,1 ml, 4 graus C durante a noite, nos orifícios de reação de cada placa de poliestireno. No dia seguinte, descarte a solução do buraco e lave 3 vezes com tampão de lavagem por 3 minutos de cada vez.

(para resumir, lavagem, o mesmo abaixo). 2. Adicionar amostra: Adicione uma certa diluição da amostra a ser testada 0,1 ml no orifício de reação embalado acima-mencionado, incube por 1 hora a 37 graus C. Em seguida, lave.

(Ao mesmo tempo, faça o orifício em branco, o orifício de controle negativo e o orifício de controle positivo). 3. Adicione anticorpos marcados com enzima-: Em cada orifício de reação, adicione um anticorpo marcado com enzima-recém diluído (diluição após titulação) 0,1 ml.

Incubar 0,5 a 1 hora a 37 graus C e lavar.

4. Adicione o display colorido líquido do substrato: adicione uma preparação temporária de solução de substrato TMB 0,1 ml, 37 graus C, 10 a 30 minutos em cada orifício de reação.

5. Reação final: Adicione ácido sulfúrico 2M 0,05 ml a cada orifício de reação. 6. Os resultados determinam: pode ser em um fundo branco, diretamente a olho nu para observar os resultados: quanto mais escura a cor dentro do orifício de reação, mais forte o grau positivo, a reação negativa é incolor ou muito superficial, de acordo com a cor é refletida na profundidade, para a cor do

Valor Od escaneado: no testador ELISA, a 450nm (se for uma renderização de cores BTS, então 410nm), para apagar o furo de controle zero ingerido para medir o valor OD de cada furo, se for maior que o valor OD de controle negativo especificado de 2,1 vezes, ou seja, positivo.

Lei indireta

1. Use a embalagem a ser tamponada para diluir o antígeno conhecido para 1 a 10 mg/ml, por furo mais 0,1 ml, 4 graus C durante a noite;

2. Lave 3 vezes no dia seguinte;

3. Adicione uma certa diluição da amostra (anticorpo desconhecido) 0,1 ml no orifício de reação embalado acima-mencionado, incube por 1 hora a 37 graus C, lave;

4. (controle de furo em branco, negativo e positivo) no furo de reação, adicione um segundo anticorpo recém-diluído com rótulo de enzima (anti-anticorpo) 0,1 ml;

5,37 graus C incubação 35-60 minutos, lavagem;

6.'A última vez que você se lavou com DDW. As etapas restantes são iguais ao "método sanduíche de anticorpo duplo" de 4, 5, 6.